Encéphalite sans méningite due au virus de la fièvre des selles Sérotype Toscana

Le rôle du virus TOS dans la production d’encéphalite sans méningite est incertain. Nous avons étudié les cas d’encéphalite à virus TOS sans méningite au moyen d’un test de réaction en chaîne de la polymérase et du séquençage de l’ADN. étudier les relations entre les modèles moléculaires du virus TOS et le spectre de l’implication neurologique

Virus de la fièvre sableuse sérotype Famille Toscana Bunyaviridae, genre Phlebovirus est le seul virus transmis par les stigmates responsable d’une maladie neurologique aiguë Le virus Toscana TOS est un virion enveloppé avec un génome d’ARN à brin négatif segmenté constitué d’ARN circulaires non covalents fermés [- La caractérisation antigénique, biologique et immunologique du virus TOS, ainsi que la réponse humorale provoquée dans la maladie aiguë, ont été largement étudiées [,,] Le virus TOS a été isolé de Phlebotomus perniciosus en Italie et endémique dans les pays méditerranéens où les vecteurs phlébotomes P perniciosus et P perfilievi sont présents Cette infection a été rapportée chez des résidents et des visiteurs revenant de régions endémiques, principalement d’Italie centrale, du Portugal, d’Espagne et de Chypre [, -] En Italie centrale, l’infection survient en été , atteignant un pic en août, avec l’activité maximale des vecteurs de phlébotomes Plusieurs méthodes ont été développées pour Diagnostic, y compris PCR nPCR nested et EIA, ainsi que la nucléoprotéine virale recombinante EIA rEIA Des symptômes tels que fièvre, myalgie, céphalées frontales sévères, vomissements, douleurs oculaires et rigidité cervicale ont été rapportés en association avec une méningite aseptique ou, En outre, des infections asymptomatiques et des infections sans atteinte du système nerveux central ont été décrites ailleurs A notre connaissance, il n’y a que des cas d’encéphalite à virus TOS sans méningite mentionnés dans la littérature disponible [, Des études sont nécessaires pour clarifier le rôle du virus TOS dans ce contexte Récemment, des variants du virus TOS ont été mis en évidence par séquençage d’ADN dans des cas de méningite aiguë. Ces résultats soulèvent de nombreuses questions sur le rôle joué par la variabilité moléculaire de la protéomorphose. Infection par le virus TOS Nous rapportons des cas d’encéphalite à virus TOS sans méningite qui ont été étudiés en utilisant le test nPCR et Séquençage ADN

Les rapports de cas

Patient En septembre, un homme italien d’un an a été référé à l’hôpital de Pistoia en raison d’une fièvre d’un jour avec céphalée, vomissements et photophobie. Il résidait dans une région de Quarrata, près de Pistoia, en Italie, où les phlébotomes L’examen a révélé que le patient semblait être alerte, sans aucun signe de troubles neurologiques focaux ou d’irritation méningée. Les réflexes pupillaires étaient normaux. Son pouls et sa pression artérielle étaient de: battements / min et / mm Hg respectivement, radiographie pulmonaire, électrocardiogramme, numération globulaire, Les résultats des tests biochimiques de routine étaient normaux Aucune lésion cérébrale n’a été mise en évidence par tomodensitométrie et IRM avec rehaussement du gadolinium. Analyse du liquide prélevé par ponction lombaire révélant un liquide céphalorachidien clair avec lymphocytes / mm, mg protéine / dL, chlorure mEq / L et glucose normal niveau mg / dL, avec un niveau de sang de mg / dL Un électroencéphalogramme EEG a montré des pointes lentes diffuses avec l’accent du lobe pariétal droit et temporal Traitement a été commencé wi administré par voie orale à la doxycycline et à l’acyclovir administré par voie parentérale. Le lendemain de l’admission, la fièvre du patient a disparu. Le patient s’est rapidement amélioré, bien qu’il se soit plaint de maux de tête pendant les semaines suivantes. Lors d’une visite de suivi un mois plus tard, il était asymptomatique, et son EEG montrait de nouvelles améliorations. Patient En août, un homme italien de plus de cinq ans avait des antécédents de pharyngodynie légère et de fièvre sub-continue hématologique. il était hospitalisé à cause de maux de tête bitemporaux et frontaux qui s’étaient développés brusquement, avec des vomissements et de la somnolence. Il était cavalier et vivait dans une région Fucecchio, près de Pistoia, Italie où des phlébotomes étaient présents et où une épidémie de Nil occidental L’examen physique a révélé que le patient était légèrement léthargique sans signes neurologiques focaux. Ni rigidité du cou ni autres signes d’irritation méningée étaient présents. Les réflexes pupillaires étaient normaux. Sa température était de ° C, et sa fréquence cardiaque et sa pression artérielle étaient des battements. min et / mm Hg, respectivementAnalysis de la radiographie thoracique et CT scan du cerveau n’a indiqué aucune anomalie Le liquide prélevé par ponction lombaire a révélé un LCR clair avec des lymphocytes / mm, mg de protéine / dL et un taux de glucose normal de mg / dL, avec un taux sanguin de mg / dL. Des électrocardiogrammes, des hémocultures et des résultats biochimiques EEG normal a montré des vagues lentes diffuses Le traitement a été commencé avec l’administration de doxycycline et d’acyclovir Le lendemain de l’admission, la somnolence et la céphalée s’amélioraient. Le patient était sorti, sans symptômes neurologiques et avec un EEG normal, le jour suivant l’apparition clinique de la maladie.

Résultats

Les titres d’anticorps mesurés dans des échantillons de LCR et de sérum par des méthodes de laboratoire standard excluent les infections causées par les virus herpès simplex et les virus cytomégalovirus, Epstein-Barr, ourlien, adénovirus, Coxsackie et Echo, Listeria monocytogenes, Borrelia, Leptospira, Rickettsia Espèces, espèces de Chlamydia, espèces de Salmonella, espèces de Brucella, Treponema pallidum, espèces de Toxoplasma et Mycoplasma pneumoniae L’examen direct et la culture du LCR étaient négatifs pour les bactéries et les mycobactéries Les prélèvements de gorge pour les bactéries et les herpesvirus étaient négatifs. Pour chaque patient, une recherche d’agents viraux a été effectuée au Département de biologie moléculaire, Section de microbiologie, Université de Sienne, dans le LCR et des échantillons de sérum obtenus à l’admission ont été extraits de μL de l’échantillon CSF en utilisant la procédure décrite par Chomczynsky et Sacchi extraction de l’ADN a été fait sur le CS Spécimen F par l’utilisation du kit QIamp Le test PCR Qiagen a été effectué selon les recommandations recommandées L’échantillon CSF a été testé négatif pour tous les virus neurotropes à ADN considérés comme des types de virus H simplex,, et; Virus d’Epstein-Barr; cytomégalovirus; virus varicelle-zona; Par le test RT-PCR de la transcriptase inverse, l’ARN extrait a été testé pour les entérovirus, le virus de l’encéphalite à tiques, le virus TOS, le virus du Nil occidental, le virus de la rougeole et le virus ourlien. Le sérum du patient était positif pour le virus TOS IgG et IgM par EIA Enzywell Virus TOS IgG / IgM, Diesse Le test sérologique n’a pas été fait sur l’échantillon CSF Identifier le virus TOS variante impliquée dans l’infection, le produit de PCR a été purifié au moyen du kit Qiagen QIA-quick spin PCR et a été séquencé par terminaison de chaîne didésoxy en utilisant un kit Sequenase USB Corporation en utilisant des amorces sens et antisens pour séquencer les deux brins La séquence a été comparée avec la séquence de référence TOS de la souche ISS Phleb et avec les variants du virus TOS circulant en Toscane La souche variante SI du virus TOS de type sauvage s utilisé comme contrôle positif dans tous les tests de RT-PCR et de séquençage L’ARN extrait de cellules infectées simulées a été utilisé comme témoin négatif La comparaison des séquences a confirmé que le produit PCR obtenu faisait référence à une souche de virus TOS très similaire à la variante SI, sauf pour le changement à la position A → G Cette mutation ponctuelle n’a pas entraîné de modifications des acides aminés. Les échantillons de LCR et de sérum prélevés lors de l’admission ont été envoyés au Laboratoire de virologie de l’Istituto Superiore di Sanità de Rome. Les résultats étaient négatifs pour l’infection par le virus du Nil et l’hémagglutination sérique et l’EIA et les procédures d’isolement du virus du LCR et de RT-PCR. Les échantillons de sérum et de liquide céphalorachidien étaient positifs pour le virus TOS IgG et IgM par rEIA [ ] Le volume A -μL de l’échantillon CSF a été utilisé pour l’extraction de l’ARN, et la présence du génome du virus TOS a été confirmée par un test RT-nPCR séquençage d’ADN comme décrit pour le premier patient Se les séquences du produit de PCR obtenues à partir du CSF, comparées à la séquence de référence TOS de la souche ISS Phleb, ont montré des changements de nucléotides avec C → T en position et G → T en position Ces mutations ponctuelles n’ont pas entraîné de changements d’acides aminés

Discussion

A notre connaissance, aucun signalement détaillé d’encéphalite à virus TOS sans méningite n’est actuellement disponible. Deux cas d’encéphalite à virus TOS sans méningite ont été signalés. Le virus a été détecté dans le liquide céphalo-rachidien en utilisant un test nPCR. Aucun autre agent pathogène n’a été détecté et aucune lésion cérébrale n’a été détectée par tomodensitométrie et IRM. Nous pensons donc que l’encéphalite a été directement Les deux patients se sont rétablis sans séquelles neurologiques, bien que des maux de tête et des altérations EEG aient persisté chez le patient. Chez ce patient, la séquence d’ADN de l’amplicon détectée par RT-nPCR a confirmé la présence d’une souche sauvage du virus TOS dans l’échantillon. L’analyse a révélé un haut degré de similarité avec la variante SI de la souche ISS Phleb, qui se trouve en Toscane depuis, sauf pour la rétromutation au sur A → G de la séquence étudiée Chez l’autre patient, une similitude étroite de la souche du virus TOS dans l’échantillon avec la souche ISS Phleb elle-même a été trouvée en utilisant l’analyse nucléotidique Les preuves issues de cette étude peuvent améliorer l’histoire naturelle de l’infection par le TOS En effet, elle confirme que le virus TOS doit être considéré parmi les causes directes de l’encéphalite sans méningite, bien que rien ne permette d’expliquer l’apparition sporadique de cette entité au cours de l’infection. Cette approche nous a permis d’établir une association directe entre des souches définies de virus TOS et des cas d’encéphalite bénigne sans méningite. Ces résultats fournissent de plus amples informations sur ce sujet. manifestation émergente de l’infectionDes études sont en cours pour caractériser ces souches de virus TOS circulant en Toscane, en été et pour identifier les épitopes potentiels impliqués dans le développement de l’encéphalite sans méningite