Traitement de la mammite infectieuse au cours de la lactation: antibiotiques versus administration orale de lactobacilles isolés du lait maternel

Contexte La mammite est une maladie infectieuse courante pendant la lactation, et les principaux agents étiologiques sont les staphylocoques, streptocoques et / ou corynebactéries. L’efficacité de l’administration orale de Lactobacillus fermentum CECT ou Lactobacillus salivarius CECT, deux souches de lactobacilles isolées du lait maternel, pour traiter la mammite lactationnelle. a été évaluée et comparée avec l’efficacité de la thérapie antibiotique. Méthodes Dans cette étude, les femmes atteintes de mammite infectieuse ont été assignées aléatoirement aux groupes. Femmes dans les groupes A n = et B n = unités journalières ingérées colonie CFU de L fermentum CECT ou L salivarius CECT , respectivement, pendant des semaines, alors que ceux du groupe C n = ont reçu l’antibiothérapie prescrite dans leurs centres de soins primaires respectifs. Résultats Le jour, les comptes bactériens moyens dans les échantillons de lait des groupes étaient similaires – log UFC / mL, et les lactobacilles ne pouvaient être Le jour, les comptes bactériens moyens dans les groupes de probiotiques et le log de CFU / mL étaient plus bas que ceux du con Trol groupe log UFC / mL L fermentum CECT et L salivarius CECT ont été isolées à partir des échantillons de lait des femmes dans les groupes probiotiques A et B. Les femmes affectées aux groupes probiotiques se sont améliorées davantage et ont eu moins de récidives de mammites que celles affectées à l’antibiotique groupConclusions L’utilisation de L fermentum CECT ou L salivarius CECT semble être une alternative efficace à l’utilisation d’antibiotiques couramment prescrits pour le traitement de la mammite infectieuse au cours de la lactation.

La mammite est une maladie courante pendant la lactation, avec une prévalence de% -% de mères qui allaitent Cette inflammation de ⩾ lobule de la glande mammaire a habituellement une origine infectieuse impliquant des staphylocoques, streptocoques et / ou corynébactéries Staphylococcus aureus a été considéré comme le principal agent étiologique de l’acutémastite, bien que Staphylococcus epidermidis apparaisse comme la principale cause de mammite chronique en médecine humaine et vétérinaire La résistance multidrogue et / ou la formation de biofilms sont très fréquentes parmi les isolats cliniques Ceci explique pourquoi la mammite est difficile à traiter avec des antibiotiques et pourquoi elle constitue l’une des principales raisons de cesser l’allaitement Dans ce contexte, le développement de nouvelles stratégies basées sur les probiotiques, comme alternatives ou compléments à l’antibiothérapie pour le traitement de l’allaitement maternel. La prise en charge de la mastite est particulièrement attrayante. Dans des études antérieures, nous avons isolé des probiotiques L’administration orale de l’une ou l’autre de ces souches, Lactobacillus salivarius CECT et Lactobacillus gasseri CECT, était une alternative efficace pour le traitement de la mammite staphylococcique dans les cas où l’antibiothérapie précédente avait échoué . La présente étude visait à évaluer l’efficacité de l’administration orale de chacune des souches de lactobacilles isolées du lait maternel, Lactobacillus fermentum CECT et L salivarius CECT, pour le traitement de la mammite lactation chez un plus grand nombre de femmes et pour comparer une telle approche avec l’antibiothérapie habituellement prescrit pour traiter cette condition

Matériaux et méthodes

Astitis et, parallèlement, sur des plaques d’agar de MRS Oxoid supplémenté avec L-cystéine g / L MRS-Cys pour l’isolement de lactobacilles Les plaques ont été incubées pendant des heures à ° C dans des conditions aérobies, sauf les plaques MRS-Cys, qui ont été incubées anaérobiquement en% azote,% hydrogène et% dioxyde de carbone dans un poste de travail anaérobie DW ScientificBactéries isolées du lait ont été initialement identifiées au niveau de l’espèce par des tests morphologiques et biochimiques classiques L’identification des bactéries appartenant à l’espèce S epidermidis ou S aureus confirmée par une méthode multiplex en chaîne par polymérase PCR basée sur des gènes dnaJ avec des amorces J-StGen ‘-TGGCCAAAAGAGACTATTATGA-‘, J-StAur ‘-GGATCTCTTTGTCTGCCG-‘, et J-StEpi ‘-CCACCAAAGCCTTGACTT-‘ dans un thermocycleur Icycler Bio-Rad Laboratories La paire d’amorces J-StGen et J-StAur donne un fragment spécifique de l’espèce bp S aureus, et la paire d’amorces J-StGen et J-StEpi donne un fragment spéciesspécifique bp S epidermidis. L’identification des streptocoques a été réalisée par amplification partielle bp et séquençage du gène tuf avec les amorces TufStrep- ‘-GAAGAATTGCTTGAATTGGTTGAA-‘ et TufStrep-R ‘-GGACGGTAGTTGTTGAAGAATGG-‘ L’identification des isolats potentiels de Streptococcus mitis a été confirmée en testant la sensibilité à l’optochine et la solubilité biliaire et en testant l’agglutination du latex avec le kit Slide Pneumo BioMérieux instabilité. Les isolats restants ont été identifiés par séquençage S rRNA avec les amorces pbl ‘-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-‘ et mlb ‘-GGCTGCTGGCACGTAGTTAG-‘ Leur identité a été déterminée sur la base Les meilleurs scores ⩾% parmi les séquences déposées dans la base de données du Laboratoire Européen de Biologie Moléculaire, grâce à l’algorithme Basic Local Alignment Search ToolIdentification de L salivarius CECT et L fermentum CECT dans les échantillons de lait Un test d’hybridation ADN-ADN a été développé l’administration orale des lactobacilles a conduit à leur présence dans le lait F Dans le cas de L salivarius, un fragment bp a été amplifié à partir de l’ADN génomique de L salivarius CECT avec les amorces SALF ‘-ATTCACCGTAAGAAGT-‘ et SALR ‘-TATCATCACCTTGGTAG-. Parallèlement, un fragment bp a été amplifié à partir de l’ADN génomique de L fermentum CECT avec les amorces Lfer- ‘- ACTAACTTGACTGATCTACGA-‘ et Lfer- ‘-TCTCACTGCTCAAGTAATCATC-‘ Les conditions de PCR étaient les suivantes: ° C pour le cycle de minutes; ° C pour secondes, ° C L salivarius ou ° C L fermentum pour secondes, et ° C pour secondes cycles; Les deux fragments de PCR ont été purifiés à l’aide du kit de purification QIAquick PCR Qiagen et marqués au moyen du système de marquage et de détection d’acide nucléique direct Amersham ECL. GE HealthcareColonies obtenues sur des plaques MRS-Cys du jour du lait ont été observées Puis, des disques Hybond-N en nylon GE Healthcare ont été posés directement sur les surfaces de culture et y ont été conservés pendant une minute. L’hybridation et la détection ont été effectuées comme décrit précédemment L’identité des isolats qui ont donné un signal positif après l’hybridation des colonies a été confirmé par le séquençage de S rRNA comme décrit ci-dessus. Les isolats de salivarius et de L fermentum ont été soumis à un électrophorèse en champ pulsé comme indiqué précédemment. Leurs profils ont été comparés à ceux de L salivarius CECT, L salivarius CECT, L salivarius CECT, L salivaire DSM, L fermentum CECT, L fermentum CECT, L fermentum CECT, et / ou L fermentum T e LMG Low Range PFG marqueur New England BioLabs a été utilisé comme standard de taille moléculaireAnalyse statistique Les données microbiologiques, enregistrées en nombre de CFU par ml de lait, ont été transformées en valeurs logarithmiques avant le calcul des moyennes et l’analyse statistique. valeurs moyennes des déterminations en double ou en triple Les variables continues « nombre de bactéries » et « score de douleur mammaire » n’étaient pas distribuées normalement Trois espèces bactériennes sont apparues dans un nombre suffisant d’échantillons de lait maternel pour permettre des comparaisons statistiques entre groupes Kruskal-Wallis différences significatives entre les comptes bactériens totaux et espèces bactériennes principales et entre les scores de douleur mammaire au début et à la fin de l’essai La même approche a été utilisée pour déterminer s’il y avait des différences dans la variation de ces variables entre les groupes. différence statistiquement significative L’association de la récurrence de la mammite avec le traitement a été comparée au test x La relation entre le nombre total de bactéries et le score de douleur mammaire a été analysée en utilisant le coefficient de corrélation de rang de Spearman pour Données non paramétriques Le niveau de signification a été fixé à Toutes les analyses ont été effectuées à l’aide du progiciel SAS, version SAS Institute

Résultats

Les autres espèces bactériennes ont été identifiées dans <% des échantillons, et les lactobacilles n'ont pu être détectés dans aucun échantillon. Des différences dans les dénombrements bactériens totaux des groupes ont été trouvées Kruskal -Wallis, P & lt; Tableau Les valeurs moyennes de la numération bactérienne totale logarithmique dans les groupes probiotiques et log UFC / mL pour les groupes A et B, respectivement, étaient significativement plus faibles P & lt; Les réductions moyennes et les cycles logarithmiques du nombre total de bactéries ont été observés respectivement dans les groupes A et B, alors que dans le groupe antibiotique, la réduction était significativement plus faible. Les espèces bactériennes dans les échantillons de lait étaient semblables à celles observées le jour. Il y avait des différences statistiquement significatives dans les comptes bactériens de chaque espèce bactérienne dominante S epidermidis, S aureus et S mitis dans les groupes à la fin de l'essai Kruskal-Wallis , P & lt; , et ils étaient toujours inférieurs P & lt; dans les groupes probiotiques que dans le groupe antibiotique Tableau Les réductions les plus importantes dans les comptes bactériens ont été trouvées dans le groupe B L salivarius Figure Il y avait une différence statistiquement significative P & lt; dans la diminution des comptes bactériens totaux bactériens et S epidermidis entre les groupes probiotiques, bien que les femmes dans les deux groupes probiotiques ont rapporté le même changement dans le score de douleur mammaire Figure La plus forte diminution du nombre de bactéries a été observée pour S aureus et log UFC / mL pour les groupes A et B, et log UFC / mL pour le groupe antibiotique Figure Les antibiotiques prescrits aux femmes du groupe C étaient l'amoxicilline-acide clavulanique%, l'amoxicilline%, le cotrimoxazole%, la cloxacilline% et l'érythromycine% Tableau L'efficacité de ces antibiotiques dans la réduction des bactéries les nombres différaient significativement Kruskall-Wallis, P & lt; Pour les bactéries totales et S epidermidis, P = pour S aureus, et P = pour S mitis Cotrimoxazole abaissé le nombre moyen de bactéries par des cycles logarithmiques et a été particulièrement efficace contre S aureus Amoxicilline-acide clavulanique a conduit à une réduction du nombre moyen de bactéries , tandis que l'efficacité de l'amoxicilline et de la cloxacilline était plus faible. Le nombre de femmes ayant reçu l'érythromycine n'a pas changé à la fin de l'étude. Les lactobacilles ne pouvaient pas être détectés dans les échantillons du groupe antibiotique. La moitié des femmes dans les groupes probiotiques Tableau Evolution des symptômes cliniques Le score moyen de douleur mammaire rapporté par les femmes était similaire au jour dans les groupes, allant - Tableau Le jour, le score de douleur mammaire s'était amélioré chez la plupart des participants, mais les femmes% du groupe d'antibiotiques n'ont signalé aucun changement ou se sont sentis légèrement moins bien. Il y avait des différences statistiquement significatives Kruskal-Wallis, P & lt; Les scores de douleurs mammaires chez les femmes assignées au groupe C variaient selon le tableau des antibiotiques et étaient largement distribués à la fin de l'essai: Les femmes ont rapporté un score de douleur intense -, les femmes se sont améliorées mais ont encore signalé une gêne pour l'allaitement maternel - et seules les femmes se sont complètement rétablies - En revanche, la plupart des femmes des groupes probiotiques% du groupe A et% du groupe B fin du procès, alors que les autres% du groupe A et% du groupe B ont signalé un léger inconfort d'allaitement Le score de douleur mammaire était fortement lié à la valeur de la charge bactérienne totale dans le lait maternel aux deux jours Spearman ρ = - et jour ρ = - P & lt; Les symptômes cliniques ont disparu ou se sont notablement améliorés chez la plupart des femmes classées dans le tableau des probiotiques, alors que l'évolution était variable parmi celles assignées au groupe d'antibiotiques Tableau; Figure En fait, toutes les femmes n = qui ont décidé d'arrêter l'allaitement au cours de l'essai appartenaient au groupe antibiotique. Le taux de récurrence de la mammite dans le groupe antibiotique% était significativement plus élevé que le taux correspondant dans les groupes probiotiques, =, P & lt; , mais il n'y avait pas de différence entre les groupes probiotiques concernant ce taux de paramètres pour le groupe A,%, et le taux pour le groupe B,%; , Tableau χ = P = Certaines des femmes qui recevaient des antibiotiques [%] ont développé une candidose vaginale, alors que cet effet n'a pas été rapporté dans les groupes probiotiques. La plupart des cas de candidose vaginale étaient associés à l'utilisation d'amoxicilline n = et le reste cloxacilline n = ou acide amoxicilline-clavulanique n = Enfin,% des femmes du groupe A ont signalé des flatulences associées à l'ingestion du probiotique L fermentum, bien que toutes aient achevé la période d'essaiDétection de L salivarius CECT et L fermentumCact Lactobacilli ont été caractérisées par la technique PFGE Les profils ont révélé que tous les isolats de L salivarius et L fermentum détectés par hybridation de colonies appartenaient aux souches CECT et CECT, respectivement Figure

Discussion

Dans des études précédentes, nous avons isolé certaines souches de lactobacilles du lait maternel, dont L salivarius CECT et L fermentum CECT Ces souches étaient particulièrement intéressantes en tant qu’alternative probiotique pour le traitement de la mammite en raison de leur origine, de leur innocuité et de leur efficacité. propriétés infectieuses et immunomodulatrices Il a déjà été démontré que les bactéries lactiques isolées du lait maternel peuvent prévenir les infections mammaires causées par S. aureus Récemment, un essai pilote a mis en évidence le potentiel de L salivarius CECT et L gasseri CECT , souches isolées du lait maternel, pour le traitement de la mammite staphylococcique Après quelques jours, les probiotiques ont réduit les comptes staphylococciques moyens par ~ cycles log, comparés à la valeur obtenue par le groupe antibiotique. Au jour, aucun signe clinique de mammite n’a été observé chez les femmes qui ont été assignés au groupe probiotique, alors que les signes cliniques ont persisté dans le groupe de contrôle tout au long de l’étude.Dans cette étude, le traitement probiotique conduit à un – la réduction du cycle du compte bactérien du lait et à une amélioration rapide de la condition La numération bactérienne finale était ~ log UFC / mL, une charge bactérienne acceptable dans le lait des femmes en bonne santé Après le traitement probiotique, L CECT salivaire et L fermentum CECT ont été détectés dans le lait, mais d’autres études sont nécessaires pour élucider les voies que les lactobacilles peuvent suivre pour coloniser la glande mammaire après l’ingestion orale.Les antibiotiques prescrits aux femmes du groupe C différaient significativement en efficacité, à la fois dans la réduction des bactéries. compte et dans l’amélioration du score de douleur Bien qu’hypothétique, il est probable qu’un changement d’antibiotique a donné de meilleurs résultats dans les cas où le traitement était inefficace après les premiers jours En fait, des cultures d’échantillons de lait incluant un antibiogramme chez les femmes présentant des symptômes de mammite semble être essentiel pour un traitement plus rationnel et efficace de cette maladie. Par exemple, les staphylocoques résistants aux Ils augmentent rapidement au niveau de la communauté , mais de telles souches restent sensibles aux antibiotiques multiples non-β-lactamines Cependant, l’antibiothérapie généralisée est liée aux taux croissants de résistance bactérienne, aux changements moléculaires susceptibles d’accroître la virulence et capacité à former des biofilms de différents microorganismes , et / ou à divers effets indésirables, y compris la diarrhée associée aux antibiotiques et la candidose vaginale Par conséquent, l’utilisation des probiotiques constitue une approche intéressante dans la prise en charge de la mastite résultats de cette étude L’utilisation de bactéries lactiques pour traiter la mammite bovine a également été testée récemment lors d’essais sur le terrain et a été comparée à l’utilisation d’antibiotiques conventionnels Les résultats des deux essais ont indiqué que le traitement intramammaire par Lactococcus lactis DPC était au moins aussi efficace que les traitements antibiotiques courants Les tests de cytométrie en flux ont démontré que les L lactis vivants peuvent déclencher réponse immunitaire ammaire pour provoquer l’accumulation de leucocytes polymorphonucléaires Ces résultats suggèrent que le mécanisme responsable de ce traitement probiotique de la mammite est associé à la stimulation du système immunitaire intramammaire de l’hôte.Les staphylocoques sont les principaux agents étiologiques de la mammite infectieuse au cours de la lactation. a été traditionnellement considéré comme l’agent le plus commun; cependant, des études récentes ont révélé l’importance croissante de S epidermidis dans la mammite bovine et humaine En effet, l’inoculation de souches de S epidermidis isolées de mammites humaines dans les glandes mammaires des souris allaitantes conduit à des signes cliniques et histologiques de mammite Le groupe S mitis contient des espèces qui ont été traditionnellement considérées comme des prototypes des commensaux des voies digestives et des voies respiratoires supérieures, ainsi que l’un des principaux agents pathogènes humains Streptococcus pneumoniae Cependant, ces dernières années, il est devenu évident que le potentiel pathogène de S mitis a été sous-estimé En conclusion, les résultats obtenus dans cette étude suggèrent que L salivarius CECT et L fermentum CECT peuvent être utilisés comme alternative efficace à antibiotiques pour le traitement de la mammite Des travaux sont en cours pour élucider les mécanismes responsables de ces effets

Remerciements

Soutien financier Ministerio de Educación y Ciencia, Espagne FUNC-FOOD [Consolider-Ingenio] et AGL-projets Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: pas de conflits